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产品内容：
产品说明：
Biorab细菌RNA快速提取试剂盒适用于革兰氏阴性菌RNA提取，可以简单快速地纯化高质量的总RNA。纯化好的总RNA可用于mRNA分离，RT-PCR，Northern杂交等下游分子实验。如提取革兰氏阳性菌RNA建议用真菌RNA快速提取试剂盒提取。
自备试剂：
氯仿
(一)菌体裂解：
1.在1.5mL塑料离心管中离心收集1～3mL新鲜细菌。注意:由于细菌RNA半衰期十分短，所以必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌。
2.吸尽液体培养基，加入0.5mL裂解液，用枪充分吹打细菌沉淀后室温放置3min，确保细菌全部裂解，没有块状物。
(二)样品纯化：
1.将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备氯仿(0.5mL裂解液需0.1mL氯仿)，振荡器上充分振荡混匀30 s。
2.12000rpm室温离心3min，吸取上清到新的离心管中，建议取400～450μL上清。
3.在上清中加入200～225μL的无水乙醇，颠倒混匀，加入RNA纯化柱中(如有絮状物或沉淀产生，一并加入纯化柱中)。12000rpm离心1min，弃穿透液。
4.在纯化柱中加入0.5mL RNA洗涤液，室温12000rpm离心30 s，弃穿透液。
(三)RNA收集：
1.将结合有RNA的纯化柱12000rpm离心1min，甩干乙醇。
2.弃收集管，将柱芯转移到1.5mL的RNase-free离心管中，加入30～50μL RNA溶解液，室温放置1min，12000rpm离心1min洗脱RNA。得到的RNA可直接用于后续实验或者-80℃存放。
3.如果要提高RNA产量，加入30-50uLRNA溶解液重复洗脱一次，合并两次穿透液；如果要提高RNA浓度，使用第一次的洗脱液加回到纯化柱中重复洗脱。
注意：建议RNA用于下游实验之前，先进行质量检测。经变性琼脂糖凝胶电泳后，会有清晰的28S和18S条带，以及中间弥散的mRNA条带，其中28S条带是18S条带亮度的1.5～2倍。有时还包括跑在最前面的较暗的5S条带。A260/A280比值1.8~2.0对应RNA纯度90～100%之间。
相关搜索：细菌RNA提取试剂盒，Bacterial RNA Extraction Kit